19 de Fevereiro de 2007

Metodos Biologicos e Moleculares de Deteccao de Viroides dos Citros

Os viróides que infectam os citros estão classificados em quatro gêneros e cinco espécies, de acordo a suas propriedades biológicas e físico-químicas (Flores et al., 2000): Pospiviroid - viróide da exocorte dos citros (Citrus exocortis viroid, CEVd); Apscaviroid - viróide da folha curva dos citros (Citrus bent leaf viroid, CBLVd, variantes CVd-Ia e CVd-Ib), viróide III dos citros (Citrus III viroid, CVd-III); Hostuviroid - viróide do nanismo do lúpulo (Hop stunt viroid, HSVd, variantes CVd-IIa, CVd-IIb e CVd-IIc); e Cocadviroid - viróide IV dos citros (Citrus IV viroid, CVd-IV). Mais recentemente, foram observadas duas novas e prováveis espécies do gênero Apscaviroid : o Citrus original sample, CVd-OS no Japão (Ito et al., 2001) e o viróide da Atalantia citroide na Espanha (Barbosa, 2004). Somente o CEVd e variantes patogênicos do HSVd são agentes causais de doenças nos citros, a exocorte e a cachexia/xiloporose, respectivamente.

A exocorte está presente em praticamente todos as regiões citrícolas do mundo. O sintoma mais característico da doença é a presença de descamamento na casca de porta-enxerto sintomáticos como o P. trifoliata, seus híbridos e o limão ´Cravo`, associados ao nanismo mais o menos acentuado. O CEVd é o agente etiológico da exocorte do P. trifoliata. Apesar dos postulados de Koch não terem sido realizados para a exocorte do limão ´Cravo` (Citrus limonia Osbek.), se considera que a mesma também seja causada por este patógeno. Trabalhos mais recentes, confirmaram que o CEVd é o agente causal dos sintomas de “yellow blotching“ ou amarelecimento de ramos de limoeiro ´Cravo` com exocorte (Barbosa, 2004).

A xiloporose foi primeiramente descrita como uma doença da lima doce Palestina. Em plantas infectadas se observavam caneluras na madeira com as correspondentes projeções na casca na zona do enxerto, sintomas que estavam associados a descoloração da madeira.

A cachexia foi descrita na California para designar uma doença do tangelo Orlando (C. reticulata x C. paradisi) com sintomas similares aos de xiloporose observados na lima doce de Palestina. A caracterização do patógeno mostrou que tanto a xiloporose como a cachexia eram causadas por varientes do HSVd (Reanwarakorn & Semancik, 1999). Ainda que o término cachexia é o que se propôs e foi aceito na comunidade científica, nos países do Mediterrâneos e América Latina, xiloporose é o nome que se utiliza mais comumente.

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Autores:
Cristiane de Jesus Barbosa 1; Carlos Augusto Dorea Bragança 2
1 Pesquisadora da Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical [email protected]
2 Bolsista PIBIC/CNPq – Estudante de Agronomia da UFBA

Los viroides

Los viroides son los agentes infecciosos de menor complejidad genética y estructural conocidos y representan una forma extrema de parasitismo. Están constituidos exclusivamente por moléculas de RNA de cadena simple, cerradas covalentemente, y de bajo peso molecular (246 a 400 nucleótidos). Carecen de actividad de RNA mensajero y se replican de forma autónoma, utilizando el sistema de transcripción de la célula susceptible (Flores et al., 1998).

El descubrimiento de los viroides está asociado a la identificación de los agentes causales de enfermedades de importancia económica, a las que inicialmente se les había atribuido una etiología viral. La enfermedad del tubérculo fusiforme de la patata había sido descrita en 1922, pero no fue hasta finales de los años 60 que se determinó que estaba causada por un patógeno subviral. La comparación de muestras de plantas infectadas con preparaciones de virus vegetales mediante análisis de sedimentación y electroforesis mostró que contenían RNAs de bajo peso molecular. El término “viroide” se acuñó para describir a este patógeno, el Viroide del tubérculo fusiforme de la patata (Potato spindle tuber viroid, PSTVd) en base a la similitud entre los síntomas que inducía y los causados por virus (Diener y Raymer, 1967; Diener, 1971). Casi simultáneamente, se describieron otros dos viroides, el Viroide de la exocortis de los cítricos (Citrus exocortis viroid, CEVd (Semancik y Weathers, 1972) y el Viroide del enanismo del crisantemo (Chrysanthemum stunt viroid, CSVd) (Diener y Lawson, 1972).

Actualmente se han caracterizado 30 especies de viroides que infectan solamente plantas superiores. El huésped natural en el cual el viroide se identificó por primera vez designa su nombre científico. El Comité Internacional de Taxonomía de Virus (CITV), clasifica los viroides en dos familias, Pospiviroidae cuya especie tipo es el PSTVd y Avsunviroidae cuya especie tipo es el ASBVd (Avocado sunblotch viroid). La familia Pospiviroida está compuesta por los géneros Pospiviroide, Hostuviroide, Cocadviroide, Apscaviroide, Coleviroide y Avsunviroide. La familia Avsunviroidae está compuesta por los géneros Pelamoviroide y Elaviroide (Flores et al., 1998; 2000). Dentro de la especies se han identificado también numerosas variantes de secuencia.

Estudios realizados con plantas infectadas con el PSTVd (Góra et al., 1994, 1997), el Viroide de las chancros pustulosos del peral (Pear blister canker viroid, PBCVd) (Ambrós et al., 1995), el Viroide del mosaico latente del melocotonero (Peach latent mosaic viroid, PLMVd) (Ambrós et al., 1998), el Viroide de la hoja curvada de los cítricos (Citrus bent leaf viroid, CBLVd) (Foissac y Duran-Vila, 2000) y el CEVd (Visvader y Symons, 1985; Gandía y Duran-Vila, 2001) han mostrado que los viroides se encuentran como poblaciones heterogéneas de variantes de secuencia. Además, se comprobó que la inoculación de una secuencia única puede restablecer nuevas poblaciones heterogéneas (Góra-Sochacka et al., 1997; Ambrós et al., 1999; Gandía y Duran-Vila, 2002). Estas informaciones indican que los viroides siguen un modelo de cuasiespecies y que los aislados están constituidos por poblaciones de genomas distintos (haplotipos) pero relacionados. La frecuencia y distribución de los distintos haplotipos suele oscilar alrededor de una o varias secuencias maestras, definidas como las de mayor eficacia biológica y que generalmente, son las más frecuentes en la población (Holland et al., 1992).

Los viroides pueden infectar monocotiledóneas y dicotiledóneas, y tanto especies leñosas como herbáceas. La gama de huéspedes de los viroides es muy variable. Un caso extremo lo constituyen por ejemplo, los viroides de la familia Avsunviroidae cuyo espectro es muy restringido (Desjardins, 1987; Desvignes, 1986; Dimock et al., 1971). Otros viroides como el HSVd (Shikata, 1990; Astruc et al., 1996) y el CEVd (Durán-Vila et al., 1986; García-Arenal et al., 1987; Mishra et al., 1991; Fagoaga y Durán-Vila, 1996) colonizan de forma natural muchas especies distintas en las que producen enfermedades o se encuentran como infecciones latentes.

Desde un punto de vista de los síntomas que inducen en los huéspedes sensibles, las enfermedades de etiología viroidal son indistinguibles de las causadas por virus, y la variedad de síntomas es amplia. Los huéspedes herbáceos y ornamentales infectados, frecuentemente exhiben síntomas foliares de clorosis, reverdecimiento, amarilleo, lesiones necróticas en el limbo y venas, epinastia y alteraciones en la forma, tamaño y fragilidad de la hoja. Generalmente la planta infectada presenta entrenudos cortos y en consecuencia son enanas (Flores y Duran-Vila, 1996).

En plantas leñosas y arborescente el período que transcurre entre la infección y la manifestación de síntomas puede ser de varios años. Los síntomas más comúnmente relatados son lesiones en la corteza del tronco o tallos (grietas, acanaladuras, escamas, descortezamiento, proyecciones acompañadas por exudaciones o impregnaciones de goma, etc). Los frutos de plantas infectadas pueden presentar alteraciones en la forma, tamaño y en la corteza puede aparecer moteado, manchas, chancros y suberización. (Flores y Rodríguez, 1981; Flores y Durán-Vila, 1996).

En huéspedes susceptibles a la infección con distintos viroides, como los cítricos y la vid, es frecuente encontrar infecciones múltiples (Flores et al., 1985; Semancik et al., 1988; Duran-Vila et al., 1988b; 1991; Szychowski et al., 1991).

A diferencia de los virus vegetales, los viroides se replican, acumulan y expresan sus síntomas mucho más eficientemente a temperaturas elevadas (30-33 ºC) (Sänger y Ramon, 1975) y a intensidades de luz asimismo altas. Los síntomas también se ven influenciados por la virulencia del aislado, el estado nutricional de la planta las condiciones ambientales y por el cultivar afectado (Lee y Singh, 1972; Diener,1979; Durán-Vila et al., 1988a)


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Autores:
Cristiane de Jesus Barbosa
Pesquisador - III
Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical
Cruz das Almas, Bahia, Brasil
C.P. 007, CEP 44380-000
[email protected]